Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的每一次中逐渐扩展

从第一次造再次出现家兔自身特异性到造再次出现1型式心血管疾病临床症状的困难重重率在儿童时期就有很好的说明了，多个家兔自身特异性白血病的儿童中所有70%在血清转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的儿童这一分之一增大到84%。相较之下，占到临床1型式心血管疾病一半以上的型式1型式心血管疾病的发病前提还无法得到充分的研究成果。

越来越多的人开始采用依此系统来判别1型式心血管疾病的困难重重：个体在造再次出现多种家兔自身特异性时重回第1过渡期，造再次出现血糖异常时重回第2过渡期，造再次出现症状时重回第3过渡期。一些多发家兔自身特异性白血病的个体，在1期和2期，困难重重更快，并其发展为发病的1型式心血管疾病。我们之前说明了了一组成员在首次监测到多种家兔自身特异性比对后至少10年无心血管疾病的正因如此快困难重重者，这组成员病人人数少，但特性非常明确。随后，我们辨认出家兔自身蛋白质特异性CD8+T蛋白质反应在困难重重很慢的病人中所基本不长期存在，但在同类型发病和仍然长期存在的心血管疾病病人中所很容易监测到。这可能断定，与困难重重病人相较，这些病人致病系统的恒定增强。

一时期研究成果断定，尽管恒定性T蛋白质(Treg)数量正常，但心血管疾病病人长期存在一些前提局限性，其中所还包括对IL-2的反应能力增加。此外，心血管疾病病人中所的畸变CD4+T蛋白质可能对恒定非常具抵抗性，表现为畸变T蛋白质的选择性消退，自然激发的Treg和体内激发的诱导Treg，以及蛋白质经历的CD4+T蛋白质中所IL-2反应消退。本研究成果的目的是说明了了CD4+恒定性T蛋白质(Treg)在一小群正因如此很慢困难重重者中所的特性，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

作法：BOX研究成果是一项以这群人为基础的纵向研究成果，在21岁以下复发的病人亲属中所检查1型式心血管疾病的危险心理因素。我们之前说明了了仍然很慢困难重重者的特性，他们依然多重家兔自身特异性白血病超过10年，但无法造再次出现心血管疾病的临床症状，慢性或非透过性致病。随后，10名继续依然无心血管疾病并愿意获取大量血液比对的很慢困难重重者设为T和B蛋白质前提比对。在目前为止的研究成果中所，8名慢困难重重者(SP组成员)，中所位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的家兔自身特异性白血病。所有的参加者都处于1型式心血管疾病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身特异性对某些蛋白质的白血病反应，然而，一名病人已经处于2期至少6年，但无法造再次出现临床症状，一名病人被诊疗为心血管疾病，该成年人72岁，在搜集实验比对时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在的测试中所对该诱导透过了单独审核。裂解外周血单个质子蛋白质(PBMCs)，采用多值流式蛋白质练成和T蛋白质选择性试验审核诱导中所Treg的基频、遗传和前提。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)透过无指派聚类比对，审核Treg遗传。

结果：与肥胖症诱导相较，来自慢困难重重体的梦境CD4+T蛋白质的指派聚类说明了，激活的梦境CD4+ Treg基频增大，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)对此增大有关。一名HbA1c上升的病人与困难重重很慢者和匹配的对照组成员相较，Treg对光有所不同。前提比对断定，与肥胖症诱导相较，来自很慢困难重重体的Treg酪氨酸的CD4+畸变T蛋白质选择性明显受损。表现为对畸变CD4+T蛋白质CD25和CD134对此的选择性增大。

图1 全面性的遗传比对说明了，CD4+Treg非典型式在慢困难重重链表中所增大。由FlowSOM分解的Treg二楼，聚集在来自所有诱导的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据上面物对此鉴定造出10个元簇:梦境T蛋白质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T蛋白质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质;线或程Treg_1;线或程Treg_2;线或程Treg_3;和线或程Treg_4。(a)采用9个不同Treg上面分解的10个元簇的MST。每个终端代表人一个坦克部队(100个坦克部队)，非常大的元坦克部队(10个元坦克部队)在终端组成员周围着色。每个终端中所的糕点图对此单个上面的对此级别。(b)每个元聚类的热图，以说明了整体上面对此。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)分解图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于原子量为每个metacluster箱子线或图(原子量> 0.05%)具体为HD和SP组成员:线或程Treg_2 (e),线或程Treg_3 (f),线或程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T蛋白质(l)。红色红色代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩质子查。此键适用于图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

图2 采用CITRUS的预测模型式证实，Treg基频的增大是困难重重很慢的徽标。分级门控(a - f)和柑橘比对(g-k)更为SP参加者和匹配的HD参加者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的代表人性图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR对此透过裂解，各种类型式FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(斑点)组成员以及诱导SP 606(红色)中所CD25+ cd127的基频综合图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控可数的箱子线或图;(c) HLA-DRloGITR−(线或程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线或程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线或程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线或程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3对此切变着色，箭头突造出的簇被辨认为SP和HD链表错综复杂的不同。(j)箱子线或图说明了了在SP(斑点)和HD(灰点)组成员中所，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对于原子量(分之一)。(k)直方图说明了每个簇的遗传(粉红色)和Treg上面相对于对此与文化背景对此(深蓝色);上列，线或程Treg_3;下面悄悄，线或程Treg_4。文化背景与所有其他簇中所上面的对此有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写秩质子查

图3 与肥胖症献血者相较，困难重重很慢者梦境treg的GITR增大。每个梦境CD4+T蛋白质元簇(梦境T蛋白质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T蛋白质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质;线或程Treg_2;线或程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个对此上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的对此热图(sp606不还包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR对此结合，说明了直方图(c)和综合图(d)。Wilcoxon配对大写秩和质子查，p< 0.07(红色)所有诱导还包括，p< 0.05(深蓝色)诱导SP 606和匹配的HD不还包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR对此，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(红色)结合，说明了直方图(e)和综合图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写秩质子查

图4 来自很慢困难重重的CD4+ treg蛋白质控制畸变CD4+T蛋白质的能力增加。SP组成员用深蓝色的线或和红色对此，HD组成员用黑色的线或和红色对此，红色的线或/红色对此诱导sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被上面为CFSE, Treg按观察的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠再造蛋白质，指导3过后透过流式蛋白质练成监测。(a-d)与CD4+反之亦然者相对于应的treg指导(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者指导。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE选择性多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性多于。采用白血病对照(激活的响应蛋白质分别为treg)算出选择性多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

图5 畸变CD4+T蛋白质对很慢困难重重的T蛋白质再造的选择性非常脆弱。SP组成员用深蓝色的线或和红色对此，HD组成员用黑色的线或和红色对此，红色的线或/红色对此诱导sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel上面，treg按观察的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠再造蛋白质，指导3过后透过流式蛋白质练成(CD25反染)和蛋白质因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同指导。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE选择性百份(b)。(c,d) CD25选择性百份(c)和CD134选择性百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共指导中所的对此。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

结论：我们得造出的结论是，来自很慢困难重重子的再造梦境CD4+Treg在GITR对此中所得到了拓展和多样化，忽视了全面研究成果Treg在1型式心血管疾病风险个体中所的异质性的必要性。

原文造中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28